نالیدیکسیک اسید برای مهار باکتری های گرم مثبت در محیط کشت استفاده می شود. این آنتی بیوتیک اثر حداقلی بر رشد سویه های گرم منفی دارد. این آنتی بیوتیک علیه سویه های مقاوم به آنتی بیوتیک ماننده سویه های مقاوم به تتراسایکلین فعال نیست. نالیدیکسیک اسید سنتز DNA را مهار می کند، از سنتز پروتئین و تقسیم سلولی نیز جلوگیری می کند. نالیدیکسیک اسید اثر ضدالتهابی نیز دارد و به عنوان یک ترکیب طبیعی (Natural Compound) استفاده می شود.